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HotStart Bst4.2 大規(guī)格(125ml包裝酶)

簡要描述:

HotStart Bst4.2 大規(guī)格(125ml包裝酶)公司正在出售的產(chǎn)品:宮頸癌細胞 磷化結(jié)蛋白封閉多肽 牛腺病毒通用PCR檢測試劑盒 大鼠內(nèi)皮抑(ES)試劑盒 ELISA 果糖1,6二磷醛縮(FBA)活性比色法檢測試劑盒 中國臺灣別樣海源菌 BCL7B蛋白抗體

更新時間:2024-01-12

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HotStart Bst4.2 大規(guī)格(125ml包裝酶)

商品屬性:

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

HotStart Bst4.2 大規(guī)格(125ml包裝酶)

100U

A-PJ1007



Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 經(jīng)酶電子重構(gòu)架和進化篩選(in silico Design & invitro Evolution),其為Bst4.0 的升級品,通用于 DNA 或 RNA 的 LAMP 或RT-LAMP 擴增。
性能提升包括 :

(1 )Bst 4.2 全系包含 熱啟動Aptamer,該配體確保酶在<30℃時,酶活封閉效率>95%,在>60℃時 1min 內(nèi)釋放酶活。該特性利于室溫建立反應(yīng)體系,并大幅降低了低溫條件下的非特異擴增;

(2)反應(yīng)溫度提升到 70℃,大幅降低引物 Dimer 的形成,提高擴增特異性,并使得粗樣品核酸釋放更加充分;

(3)全系包含 Helicaser,因此,允許在不使用 F3/B3 引物的情況下進行 LAMP 擴增(easy LAMP),并允許 FIP/BIP 的引物用量降低一倍。這將進一步降低非特異擴增,并使得擴增均一性大幅提升。
image.png

注意: HotStart Bst 4.2 DNA/RNA Polymerase(8U/μl)不含有甘油,可用于凍干體系的建立。
QQ截圖20240110094643.jpg儲存:長期保存請置于-20℃以下(12 個月有效);制品反復(fù)凍融 10 次不影響性能,但應(yīng)避免反復(fù)凍融;制品由于含有高濃度的糖組分,-20℃保存的酶制品,在融化時可能會有結(jié)晶物,此時在 30℃的溫度下融化,過高的溫度可能會導(dǎo)致熱啟動性能下降。一經(jīng)融化推薦置于 2-8℃保存,在此條件下制品穩(wěn)定儲存 6 個月。
特殊說明:
(1) Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 在用于 LAMP 擴增時的推薦反應(yīng)溫度為 65-70℃,最佳反應(yīng)溫度為 70℃。因此其可替代  的 Bst4.0 系列,用于標準 LAMP的擴增。
(2) 由于 反應(yīng)溫度為 70℃,因此在進行eLAMP 擴增時,反應(yīng)溫度為 70℃。
1. 標準 LAMP 擴增
1.1 10xLAMP Primer Mix:FIP/BIP=16 μM each; LF/LB=4
μM each; F3/B3=2 μM each
1.2 配制 LAMP 反應(yīng)體系
10xBst4.2 Buffer(Mg2+ free) 2.5 μl
100mM Mg2+
1.5 μl
dNTP Mixture(10 mM each) 3 μl
10xLAMP Primer Mix 2.5 μl
HotStart Bst 4.2(8U/μl) 1 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到總體積 25 μl
1.3 反應(yīng)體系配好后,置于 65-70°C 反應(yīng) 20~30min。
2. eLAMP 擴增
2.1 10xeLAMP Primer Mix : FIP/BIP=8 μM each;
LF/LB=4 μM each。
注意:eLAMP(easy LAMP)為去除 F3/B3 引物的方法,為 Bst4.2 系列專用的使用策略,對于大多數(shù)引物組,在Helicaser 的加持下,擴增速度幾乎不受影響。如引物擴增效率低,可提高 FIP/BIP 濃度到 12~16uM。
2.2 配制 eLAMP 反應(yīng)體系
10xBst4.2 Buffer(Mg2+ free) 2.5 μl
100mM Mg2+
1.5 μl
dNTP Mixture(10 mM each) 3 μl
10xeLAMP Primer Mix 2.5 μl
HotStart Bst 4.2(8U/μl) 1 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到總體積 25 μl
2.3 eLAMP 的擴增溫度為 70°C,反應(yīng) 20~30min。
其它注意事項
(1) 制品中包含高濃度的鹽組分,使用時做好個人防護,防止制品與皮膚、眼、鼻、呼吸道等接觸和吸入,一旦接觸或吸入,請用大量的清水沖洗。
(2) 防止氣溶膠污染,盡可能進行分區(qū)操作。

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PCR基本步驟及注意事項?

一、實驗原理

PCR是體外人工選擇性擴增DNA的一種方法,它類似于生物體內(nèi)DNA的復(fù)制。在生物體內(nèi)DNA復(fù)制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而體外PCR反應(yīng)同樣需要類似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設(shè)計的特定序列,實現(xiàn)對特定位置的擴增;PCR Buffer提供一個反應(yīng)的緩沖環(huán)境;反應(yīng)過程同生物體內(nèi)一樣,DNA雙鏈打開,引物結(jié)合模板,延伸形成新鏈。而這些過程在生物體內(nèi)靠DNA解旋酶解鏈,而在體外在通過控制反應(yīng)溫度實現(xiàn)的。如常用94℃變性模板DNA打開雙鏈,在退火溫度處引物結(jié)合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反復(fù)重復(fù)此過程即可實現(xiàn)對特定片段DNA的大量擴增。到第三循環(huán)開始才產(chǎn)生出和靶DNA區(qū)段相同的DNA分子,進一步循環(huán)地產(chǎn)生出靶DNA區(qū)段的指數(shù)加倍。

在擴增后期,由于產(chǎn)物積累,使原來呈指數(shù)擴增的反應(yīng)變成平坦的曲線,產(chǎn)物不再隨循環(huán)數(shù)而明顯上升,這稱為平臺效應(yīng)。平臺期(Plateau)會使原先由于錯配而產(chǎn)生的低濃度非特異性產(chǎn)物繼續(xù)大量擴增,達到較高水平。因此,應(yīng)適當調(diào)節(jié)循環(huán)次數(shù),在平臺期前結(jié)束反應(yīng), 減少非特異性產(chǎn)物。到達平臺期(Plateau)所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。

二、主要的成分

1.模板可以是多種形式,主要包括基因組DNA、質(zhì)粒DNA、攜帶病毒的基因組DNA、PCR產(chǎn)物,cDNA等,但不能為RNA。對于不同類型的模板,其主要不同在于預(yù)變性的時間以及模板的量。一般對于大的基因組DNA預(yù)變性時間10min足夠,質(zhì)粒DNA2min、攜帶病毒的基因組DNA預(yù)變性2min、PCR產(chǎn)物預(yù)變性2min即可。

注意cDNA為單鏈DNA,但仍可做PCR的模板,只不過在第一輪循環(huán)時只有一個引物結(jié)合,合成另一條鏈。從第二輪開始,兩個引物均與特異位點結(jié)合,從而實現(xiàn)了與常規(guī)PCR的接軌。而同作為單鏈的RNA卻不能進行PCR擴增,原因就在于實現(xiàn)PCR反應(yīng)的是DNA聚合酶,只能特意識別DNA鏈。

2.對于模版的量來說,一般25ul體系DNA的質(zhì)量為50—100ng。對于基因組DNA由于其結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜,提取的濃度也往往比較大,為防止?jié)舛冗^大對PCR造成影響,故需對提取的DNA進行梯度稀釋。否則濃度過高則可能會引起非特異性擴增。對于質(zhì)粒及PCR產(chǎn)物由于其結(jié)構(gòu)簡單,且提取濃度一般較低,則無需稀釋。

PCR實驗中應(yīng)該注意的問題有哪些?

沒有ct值

檢測結(jié)果遇到?jīng)]有Ct值情況,排查是否有以下問題:

1、循環(huán)數(shù)不夠(一般不超過45循環(huán),不僅背景值提高,定量也不準);

2、PCR程序設(shè)置錯誤,檢測熒光信號的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時采集,TaqMan法則一般在退火結(jié)束時或延伸時采集信號,另外熒光采集是否選中;

3、引物或探針降解。可通過PAGE電泳檢測引物和探針是否降解;

4、模板量可能降解或上樣量不足(不超過500ng,根據(jù)試劑盒說明書即可), 對未知濃度的樣本應(yīng)從系列稀釋樣本的最高濃度做起;如果發(fā)生模板降解,應(yīng)考慮樣本準備中雜質(zhì)的引入及反復(fù)凍融的情況,建議將模板樣本小量分裝儲備,避免反復(fù)凍融;

5、引物探針是否合適(尤其是引物跨越內(nèi)含子,以確保擴增基因組DNA;上下游引物Tm值超過4℃以上也會影響擴增)。

ct值過晚

在相對定量中, Ct值一般控制在15—25之間比較好,如果在絕對定量中, 對低拷貝數(shù)的樣品,Ct值會增大, 但是一般不宜超過40循環(huán), 否則定量不準確。

因此,判斷Ct值出現(xiàn)過晚是否屬于非正常情況, 需要根據(jù)具體實驗設(shè)計和目的進行。

1、擴增效率低。引物之間或者引物和探針的比例不合適, 需要進行優(yōu)化;引物或探針設(shè)計不合理, 需要重新設(shè)計;

2、PCR程序不合適, 改用三步法進行反應(yīng), 或者優(yōu)化退火/延伸溫度, 可以適當降低退火溫度; 退火/延伸時間短(可以在推薦的時間條件下延長10s);

3、MgCl2濃度不合適,增加鎂離子濃度等。PCR各種反應(yīng)成分的降解或加樣量的不足;

4、PCR產(chǎn)物太長。PCR產(chǎn)物設(shè)計超過500bp;

5、模板中存在抑制物。用高純度模板進行PCR檢測或?qū)⒛0暹M行稀釋。

公司正在出售的產(chǎn)品:

人鼻病毒通用染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

不透光相關(guān)蛋白ELISA試劑盒 OPAs免費代測試劑

附紅細胞體(嗜血支原體)屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒

基孔肯尼雅病毒PCR檢測試劑盒供應(yīng)

遲現(xiàn)抗原4ELISA試劑盒 VLA4免費代測試劑

甲型流感病毒72亞型PCR檢測試劑盒說明書

轉(zhuǎn)基因植物Sad基因PCR檢測試劑盒

C-型凝集域家族2成員CELISA試劑盒

貓衣原體PCR檢測試劑盒

登革熱病毒PCR檢測試劑盒

促腎上腺皮質(zhì)激樣中葉肽ELISA試劑盒

貓衣原體探針法熒光定量PCR試劑盒

馬杜拉放線菌探針法熒光定量PCR試劑盒

蛋白激BαELISA試劑盒

產(chǎn)氣莢膜梭狀桿菌B型探針法熒光定量PCR試劑盒

禽痘病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

蛋白體亞基α1ELISA試劑盒

病毒N3亞型(AIV-N3)核檢測試劑盒

病毒H7亞型(AIV-H7)核檢測試劑盒

淀粉樣蛋白β前體樣蛋白2ELISA試劑盒

皮炎外瓶霉染料法熒光定量PCR試劑盒

馬爾太蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒

端粒延長分子2ELISA試劑盒

流感嗜血桿菌型PCR檢測試劑盒

馬疽桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

多肽-N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移14ELISA試劑盒

凝固陰性葡萄球菌核檢測試劑盒

禽副粘病毒3PCR檢測試劑盒供應(yīng)

法尼基轉(zhuǎn)移αELISA試劑盒

貓嗜衣原體PCR檢測試劑盒

藍氏賈第鞭毛蟲A型探針法熒光定量PCR試劑盒

人富亮氨α2糖蛋白1(LRG1)檢測試劑盒elisa

諾氏梭狀桿菌PCR檢測試劑盒

歐雅病毒核檢測試劑盒

人假定蛋白LOC677340試劑盒ELISA

真菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒

艾特韋病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

人轉(zhuǎn)運體樣蛋白4(SLC44A4)ELISA試劑盒

黑色普雷沃菌探針法熒光定量PCR試劑盒

馬爾太蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒

U型肌激,線粒體(CKMT1A)試劑盒ELISA

HotStart Bst4.2 大規(guī)格(125ml包裝酶)棒桿菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒

豬圓環(huán)病毒通用型(PCV-U)核檢測試劑盒

人補體蛋白3(C3) 試劑盒 ELISA

皮炎芽生菌PCR檢測試劑盒

 


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