熒光定量PCR試劑盒的樣本處理及要求介紹
點擊次數(shù)：614 更新時間：2021-07-19
熒光定量PCR試劑盒是把RNA合成cDNA，然后再對此cDNA進行擴增的試劑盒。RNA的純度會影響cDNA的合成量，而制備RNA的關(guān)鍵是要抑制細胞中的RNA分解酶和防止所用器具及試劑中的RNA分解酶的污染。
往預(yù)先包被犬硫酸類肝素（HS）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺和樣品中的犬硫酸類肝素（HS）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。
下面要為您介紹的是熒光定量PCR試劑盒的樣本處理及要求：
1、血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2、血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于2-8C1000g離心20分鐘，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、組織勻漿：用預(yù)冷的PBS（0.01M，pH=7.4）沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1：9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復(fù)凍融。再將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。
4、細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
希望上述內(nèi)容能夠幫助大家更好的了解本產(chǎn)品。
